纯（chún）氟（fú）油Fluo-Oil 135(氟油（yóu）3M Novec HFE7500电子氟化（huà）液的替（tì）代（dài）品)

Fluo-Oil 135（简称FO135） 是（shì）一种纯氟（fú）化油，可用于替换氟（fú）油（yóu）3M Novec HFE7500电子氟化液。 Fluo-Oil 135氟油（yóu）的化学和（hé）物理化学性（xìng）质与3M Novec HFE7500 相似，如下表所示:

优势

生物相容性、可重复（fù）性和稳定性（xìng）。

如（rú）何使用？

氟油Fluo-Oil 135用（yòng）于稀释（shì）FluoSurf Neat表面活（huó）性剂或已经用Fluo-Oil 135油（yóu）稀释的表面活性剂。

（由于（yú）FluoSurf Neat表面活性剂是一种PFPE-PEG结构的（de）复（fù）杂高（gāo）效纯表（biǎo）面（miàn）活性剂，因为（wéi）类似于PFPE-PEG结构的纯（chún）表面活（huó）性（xìng）剂如FluoSurf Neat，Surf-Drop，PFPE-PEG-PFPE两嵌段或三嵌段表面（miàn）活性剂，Surf 含氟表（biǎo）面活（huó）性剂（jì）等，基本上都可以使用纯氟（fú）油（yóu）Fluo-Oil 135进行（háng）稀释。稀释（shì）的浓度从0.2%到12%之间（jiān）。）

保存

室温（wēn）下（xià）避光保（bǎo）存

安（ān）全注（zhù）意事项

● 避免吸入、摄入和接触皮肤（fū）和眼（yǎn）睛

● 穿戴耐（nài）化（huà）学腐蚀的个人防护装（zhuāng）备

● 戴上合适的（de）手套

● 穿合适的防护服

● 戴侧护罩的安全眼镜

与3M HFE7500油产生液滴（dī）性能的测试比较

分别用3M HFE7500和Fluo-Oil 135氟化油稀释FluoSurf neat表面（miàn）活性剂，得到4w/w%的质量浓度。

水（shuǐ）滴（dī）产生或油包水液（yè）滴产生的（de）两相流速：

油相流速为300μL/hr，水相流速为100μL/hr。

水相为PBS溶液或100μM荧光素的PBS溶液（用于测试（shì）液滴的泄露）

倒置显微镜观察和Image J软件（jiàn）分析。

一、液滴尺寸（cùn）及其分（fèn）布（bù）

在Fluo-Oil 135和HFE7500油中，产生相似尺寸的水滴。在既定流速参数下，液滴的平均直径为110μm。液滴尺寸（cùn）的CV分别为2.3%（Fluo-Oil 135油）和2.9%（HFE7500油）。

二（èr）、液（yè）滴稳定性

大（dà）多数研究团队使用液滴微流（liú）体进行细胞封装或 PCR 应用。 因此，需（xū）要通过 PCR 的（de）加（jiā）热循环以及在 37°C 下长（zhǎng）期孵育来产生稳定的（de）液滴。 表（biǎo）面活性剂的选择至关重要，但（dàn）选（xuǎn）择油同样（yàng）重要，以确保可重复的实验（yàn）以及单分（fèn）散液滴群的生成和保存。

分别从三（sān）个方面测试液滴的稳定（dìng）性：一是把液滴重新（xīn）注入到玻璃（lí）观察腔室（shì）内（nèi）；二是经典的PCR热循（xún）环过（guò）程，循环过程30次，每次热循环为98°C运行10s, 50°C运行5s, 72°C运行10s；三是置于37℃的培养箱内放置3天（tiān）。对1万（wàn）个液滴进行分析。

无论是在 Novec™ HFE 7500 还（hái）是 Fluo-Oil™ 135 中形（xíng）成 FluoSurf™ 稳定的液滴，在 PCR 加热循环后或在 37°C 孵育 3 天后，液滴平均尺寸在生成时保持不变 [约（yuē） 110μm (0.7nL)] 。此外，液滴种（zhǒng）群仍（réng）然是单（dān）分（fèn）散的。 根据统计分析，计算出在加（jiā）热循环后，只有 5% 的整体液（yè）滴的大小与平均初始液滴直径（jìng）的差（chà）异超过 10%。

将（jiāng）氟化油（yóu）从 Novec™ HFE 7500 切换到 Fluo-Oil™ 135 对液滴（dī）稳定性（xìng）没有影响（xiǎng）。

三、液滴内的（de）分子滞留（liú）

基（jī）于液滴的化（huà）学或（huò）生（shēng）化分析依赖（lài）于试剂在单个液滴中保持隔离。 泄漏到（dào）连续相和液滴之间的交换，即使很低，也会影响结（jié）果的完整性，因此，分子保留是选（xuǎn）择氟（fú）化油（yóu）时要考虑的重要参数。 众所周知，氟化（huà）油会限（xiàn）制液滴之间的分子（zǐ）交换，因此应验证切换油的影（yǐng）响。

同时生成（chéng）两种油（yóu）包水乳液[“空”（负载 PBS）和“满”（负载荧光素）液滴]，一次使用 Novec™ HFE7500，然（rán）后使用 Fluo-Oil™ 135 作为连（lián）续（xù）相。 两种（zhǒng）混合物，每（měi）一种都包含（hán）两个（gè）种群，在 37°C 下（xià）孵育，并在不（bú）同（tóng）的时间点拍摄照片。 使用 ImageJ 软件对液滴内荧光（guāng）强度的（de）演变进（jìn）行了（le）统计定量分析。

上图显示了两个群体之间平均荧光强度差异的演变（染料加载和（hé）空液滴（dī））以（yǐ）及在初始时（shí）间（jiān）点（diǎn）和 48 小（xiǎo）时（shí）后相关的（de）荧光（guāng）和明场（chǎng）图片。

在 24 小（xiǎo）时的过程中，两种（zhǒng）氟（fú）化油产（chǎn）生的液滴中荧光素的泄漏率相似（sì）（约 15% 泄漏），并且在（zài） Fluo-Oil™ 135 中产（chǎn）生液滴的情况下保（bǎo）持恒定 3 天。相（xiàng）反，在 24 小时后， Novec™ HFE7500 中液滴的泄漏继续减少（shǎo）并（bìng）达到 30% 左右。 这种较长孵育时间的（de）较（jiào）差保留性能（néng）可归因于后（hòu）一种油的粘度略低，加速了液滴之间更（gèng）快的分子交换。

结论

对于基于液（yè）滴的微流体（tǐ）应用，从一（yī）种（zhǒng）氟化油类型切换到另一种类型（xíng）可能会对（duì）微流体实验的过程产生重大（dà）影响，尤其是对液滴的有效生成产生重大影响。 在氟油3M Novec™ HFE7500电子氟化（huà）液 和 氟（fú）油Fluo-Oil™ 135 的情况下，已证实更（gèng）换这两（liǎng）种氟化油对实验条件和结果没有影响（xiǎng）。 当使用（yòng） Fluo-Oil™ 135 作（zuò）为连续相时，甚至（zhì）可（kě）以（yǐ）观（guān）察到荧光（guāng）素在液（yè）滴内的更好（hǎo）保留。

氟化油Fluo-Oil™ 135 是用于液滴（dī）微流体应用的3M Novec™ HFE7500 氟油 的有效替代品。